凍(dong)存細胞到貨處(chu)理 1、收到細胞(bao)后，檢查外包裝(zhuang)情況和箱內(nei)是否還有(you)干冰(bing)。如有(you)外包裝(zhuang)破損(sun)干冰(bing)已揮(hui)發等 問題，請即時聯(lian)系(xi)。 2、將細(xi)胞取出轉移至(zhi)液(ye)氮或－80 度冰箱保存，建議盡早復蘇(su)。 3、復蘇(su)第(di)(di)一管如有活性狀態問題及時與我們聯系，會有技術人(ren)員與您溝通指(zhi)導后再(zai)復蘇(su)第(di)(di) 二(er)管。特別說(shuo)明：未與我方聯系擅自復蘇第二(er)管出現問題不予售后。 細(xi)胞復蘇 1、 從(cong)液氮中取出細胞凍存管(guan)（注意：佩戴防爆管(guan)面具），快速將其置入 37℃水浴中(zhong)解凍， 直(zhi)至(zhi)凍存(cun)管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭(shi)凍(dong)存管外壁； 2、將(jiang)凍存管中的細胞移(yi)至(zhi)含(han) 5ml 培養基的 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離心 5min； 3、棄上清，沉淀用 5ml 培養基重懸，接(jie)種 T25 培養瓶，于(yu) 37℃,5%CO2 細胞培養箱中 培(pei)養(yang)； 4、第二天，換(huan)用(yong)新鮮培養(yang)基(ji)繼續培養(yang)。 細(xi)胞傳代 1、細胞(bao)生長至覆蓋(gai)培養瓶(ping)的 80%面積(ji)時，棄 T25 培(pei)養瓶中的培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞一次： 2、添加(jia) 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待(dai)細胞回縮(suo)變圓后 加(jia)入 5ml 培(pei)養液終止消(xiao)化，再輕輕吹打細胞使(shi)之(zhi)脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管 中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min； 3、棄上清，沉淀(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培養基重(zhong)懸，然(ran)后(hou)按 1:2 比例(li)進行分(fen)瓶傳(chuan)代（兩個 T25）， 補充(chong)新的(de)培(pei)養基至 5-8ml/瓶，最后放(fang)入 37℃,5%CO2 細(xi)胞培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)； 細胞(bao)凍存 1、細胞生長至覆蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面積時，棄 T25 培(pei)養瓶中(zhong)的培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞一(yi)次； 2、添加(jia) 0.25%胰蛋(dan)白(bai)酶消化(hua)液(ye)約 1ml 至培養瓶中，倒置顯(xian)微鏡下(xia)觀察，待細胞回縮變圓后 加入 5ml 培養液(ye)終止消化，再輕輕吹打細胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)后將懸液(ye)轉移至 15ml 離心管 中，1000rpm 離心 5min； 3、 棄上(shang)清，沉淀細胞(bao)加入 1ml/支的富衡無血清凍存液（FH7001），混(hun)勻后加入凍(dong)存管中。 （如(ru)：凍(dong)一支，加(jia)入 1ml 無血清凍存(cun)液） 4、 將凍存(cun)細(xi)胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液(ye)氮罐中，需(xu)在(zai)-80℃冰箱 存放 24 小時以上。 本庫的細(xi)胞(bao)系（株）僅用于科研工作
