細胞基質金屬蛋白酶12活(huo)性熒光定(ding)量檢測(ce)試劑盒產品(pin)說(shuo)明書(shu)（中文版）
主要用途
細胞(bao)基質金屬蛋白酶12（MMP-12）活性熒光定量檢(jian)測試劑(ji)是一種旨(zhi)在通過熒光探針(zhen)5-羧基熒光素供體和QXL受體標記的多(duo)肽底物RPKPVENvaWRK，在蛋白(bai)酶(mei)的水解(jie)下，解(jie)離抑制基團(tuan)，產生熒光產物(wu)，即采用熒光法來測定樣品中(zhong)酶(mei)活性的(de)*而經典的(de)技(ji)術方法(fa)。該技(ji)術(shu)經過精心研制、成(cheng)功實驗證明的(de)。其適用于各種細胞裂解萃取(qu)液(ye)樣(yang)(yang)品(pin)（動物、人體）、部分或*純化酶樣(yang)(yang)品(pin)中基質金屬蛋白酶12的(de)定量檢測，以及抑(yi)制(zhi)劑和激(ji)活劑的(de)篩選。產品嚴格無菌(jun)，即(ji)到即(ji)用，操(cao)作簡捷，性能穩定(ding)，安全可靠。
技(ji)術背景
基質金屬(shu)蛋白酶（Matrix metalloproteinases；MMPs）是一類結構(gou)高(gao)度(du)同(tong)源的分(fen)泌(mi)型(xing)或膜相關性(xing)鋅內(nei)肽(tai)酶的總稱，因含有金屬（鋅(xin)、鈣）離子而得名。其功能在于分(fen)解細胞外基(ji)質成分(fen)。迄今為(wei)止發現的MMPs至少有28種(zhong)，幾乎能降解除多糖(tang)以外的全部細胞(bao)外基質(zhi)（extracellular matrix）成分，同時參(can)與(yu)胚胎發育、形(xing)態形(xing)成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、組織再吸收（tissue resorption）、疾(ji)病(bing)發(fa)生(sheng)，例(li)如關節炎、癌細胞浸入轉移等(deng)。根據降解(jie)的底物不同(tong)可(ke)將(jiang)MMPs分為4大類：（1）膠原酶：MMP1、MMP8、MMP13主(zhu)要(yao)消化(hua)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原(yuan)和(he)蛋白多糖；（2）明膠(jiao)酶（Ⅳ型(xing)膠原酶）：MMP2、MMP9，又稱明膠酶(mei)A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和(he)彈性纖維；（3）基(ji)質溶(rong)解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12，主要(yao)作用(yong)于(yu)纖維粘(zhan)(zhan)連(lian)蛋白、層(ceng)粘(zhan)(zhan)連(lian)蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9；（4）膜型金屬(shu)蛋白酶：MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP，主要作用于明(ming)膠、Ⅳ型膠(jiao)原、MMP2。體(ti)內絕大多數細(xi)胞(bao)并不(bu)儲備MMPs，當需(xu)要MMPs的信號(hao)傳遞(di)到細胞后(hou)才臨時(shi)合(he)成，合(he)成的MMPs以無活性的酶(mei)原（proenzyme）形式分(fen)泌到細胞外，隨后被多(duo)種(zhong)蛋白酶和非(fei)蛋白酶水解以及(ji)熱處理激活，一種(zhong)激活的MMPs可(ke)激活另一種(zhong)MMPs，形成瀑(pu)布效應。基(ji)質(zhi)金屬蛋白酶12（MMP12），又(you)稱為(wei)巨噬(shi)細胞(bao)彈力(li)蛋(dan)白酶（macrophage elastase），其目標蛋(dan)白是彈(dan)性蛋白（elastin）、纖(xian)維連接蛋(dan)白（fibronectin）、層粘蛋白(bai)（laminin）、纖(xian)維蛋白溶酶原（plasminogen）、尿激(ji)酶型(xing)纖溶(rong)酶原激(ji)活物受(shou)體(ti)（u-PAR）和組織因子通(tong)路抑制劑(ji)（tissue factor pathway inhibitor）。MMP12與吸煙型(xing)肺氣腫（smoke-induced emphysema）、腫瘤和其它疾病等發生(sheng)有(you)關。MMP12酶原型為(wei)54kD，而(er)活化型為(wei)45kD和(he)22kD。基質金屬(shu)蛋白酶12的活性(xing)檢(jian)測通過熒光共(gong)振(zhen)能量轉移法（Fluorescence resonance energy transfer；FRET），即傳(chuan)遞激發狀態的能量由處于較短波(bo)長的供體(ti)（donor）到覆蓋供體波長的受體（acceptor），使得距離依(yi)賴性反(fan)應(ying)的供體(ti)的散(san)發光(guang)子(zi)淬滅(mie)（quench）。基于多肽底物RPKPVENvaWRK兩(liang)端標記(ji)的供體熒光探針5-羧基熒光素（5-carboxyfluorescein；5-FAM）受到另一個受體基團QXL的抑制而熒光淬滅（quench）。一旦多肽受到MMP12水解，釋(shi)放出具有強烈熒(ying)光的5-羧基熒(ying)光(guang)素(su)多肽片(pian)段(duan)，據此根據其熒光強(qiang)度（激發波(bo)長490nm，散發波(bo)長520nm）的變(bian)化，來定(ding)量測定(ding)基質金屬蛋白(bai)酶12的活性。基質金屬蛋(dan)白酶(mei)12反應系統為(wei)：
MMP12
5-FAM-RPKPVE-Nva-WRK-QXL-NH2 → 5-FAM-RPKP + VE-Nva-WRK-QXL-NH2
