HUVEC 人臍靜脈內皮細胞(bao)
原代內(nei)皮(pi)細(xi)胞培養(yang)基，成分：88%原代內(nei)皮(pi)基礎培養(yang)基+10%FBS+1%P/S+1%原代內(nei)皮(pi)細(xi)胞培養(yang)添加劑 操作(zuo)步(bu)驟(zou)： 復蘇步(bu)驟(zou)：①凍(dong)(dong)存管從液(ye)氮(dan)或(huo)-80℃冰箱(xiang)中取出放(fang)入(ru)PE手套中，迅速沒(mei)入(ru)37℃水浴(yu)鍋，搖晃凍(dong)(dong)存管加速溶解(jie)，以 1min內(nei)全部溶解為宜；②在超凈臺(tai)中將溶解好(hao)的細(xi)胞液加入(ru)到(dao)裝有9mL*培養(yang)基的離心管內(nei)，1000-1200rpm 離心5min，棄(qi)去上清液，用1-2mL*培養基(ji)重(zhong)懸細胞。③將(jiang)細胞懸液加(jia)入到(dao)含有5-6mL*培養基(ji)的T25瓶 中，放入培(pei)養(yang)箱(xiang)培(pei)養(yang)。 細胞傳代：①將舊培養液吸除(chu)，PBS清(qing)洗兩遍后，加(jia)入1-2mL胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；②鏡下觀(guan)察 消化情況，在細胞(bao)邊緣縮小，貼壁松動時(shi)（可用吸管(guan)吸起些許胰(yi)酶輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)吹打細胞(bao)層某處，肉眼可見(jian)細胞(bao)層脫落， 即消(xiao)化完成，否則繼(ji)續消(xiao)化），直接吸掉胰(yi)酶，加入5-6mL*培養基(ji)，輕(qing)輕(qing)吹打細胞層(ceng)，把細胞層(ceng)吹落，吹 散。③將細胞(bao)懸液(ye)按1:2比例分到新的(de)T25瓶中，添(tian)加適當的(de)*培(pei)養基，把細胞(bao)懸液(ye)打勻，于培(pei)養箱中培(pei)養。； ④注意(yi)培養基(ji)pH值變化和細(xi)胞密(mi)度，定期換液(ye)（每周2-3次），待細(xi)胞密(mi)度達(da)到80%-90%時，重復傳代(dai)操作或(huo)者 凍存。
